Архив журнала «Онкохирургия» за 2013 год
Анализ экспрессии изоформ сплайсинга гена KIT: Kit+ и KitA+ в гастроинтестинальных стромальных опухолях (GIST)
Гапонова А.В.1,2, Кекеева Т.В.1,2, Завалишина Л.Э.1, Андреева Ю.Ю.1, Франк Г.А.1
1) Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П.А. Герцена,
2) Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова,
Москва, Россия
Гастроинтестинальные стромальные опухоли составляют по разным данным от 0,1% до 3% от всех злокачественных новообразований желудочно-кишечного тракта и принадлежат к наиболее часто встречаемым мезенхимальным опухолям данной локализации. 5% GIST обусловлены мутацией в гене PDGFRA, 60-89 % GIST возникают вследствие мутаций гена KIT. Мутация в гене KIT запускает основной механизм развития GIST – гиперэкспрессию рецептора c-kit (CD-117) и его гиперактивацию. В 9 экзоне пре-мРНК гена KIT существует сайт альтернативного сплайсинга, результатом которого является наличие двух изоформ зрелой мРНК гена KIT: Kit+ и KitA+.
Цели исследования: анализ мутаций гена KIT и PDGFRA в гастроинтестинальных опухолях, анализ экспрессии Kit+ и KitA+ изоформ мРНК и оценка возможной корреляции между уровнем экспрессии изоформ мРНК и генотипом опухоли, степенью экспрессии c-kit и стадией заболевания (наличием метастазов).
Нами были изучены образцы опухоли (парафиновые блоки) от 58 пациентов с диагнозом GIST. Анализ мутаций 9, 11 экзонов гена KIT и 18 экзона гена PDGFRA проводили методом ПЦР. Анализ экспрессии транскриптов изоформ Kit+ и KitA+ проводили методом ОТ-ПЦР. Экспрессию изоформ мРНК и определение мутаций оценивали по результатам гель-электрофореза в 8%-ном полиакриламидном геле и секвенированием. В качестве нормы для оценки уровня экспрессии изоформ была взята кДНК нормальной ткани яичка, для которой показана экспрессия CD-117. Частота выявленных мутаций в изученных нами образцах гастроинтестинальных стромальных опухолей составила 88% (9 экзон гена KIT – 15 %, 11 экзон гена KIT – 55%, 18 экзон гена PDGFRA – 14%, 13 экзон гена KIT – 2 %, 17 экзон гена KIT – 2%). Экспрессия Kit+ преобладает над KitA+ в 45 образцах, в 7 образцах показан одинаковый уровень экспрессии обеих изоформ, экспрессия только Kit+ была обнаружена в 5 образцах. Для образцов GIST с преимущественной экспрессией Kit+ характерны мутации в 11 экзоне KIT. Для образцов GIST c экспрессией только Kit+ изоформы или обоих изоформ в одинаковом соотношении характерны мутации в 9 экзоне KIT и 18 экзоне PDGFRA. Как известно, данные мутации связаны с неблагоприятным прогнозом и слабым ответом пациентов на терапию таргетным препаратом Гливек.
Полученные нами результаты свидетельствуют о возможной взаимосвязи уровня экспрессии изоформ и типа мутации, которая в свою очередь коррелирует с прогнозом заболевания.
Стр. 80
Издательство
«Бионика Медиа»
Москва, ул. Профсоюзная, 57
(в здании НИИ "Полиграф")
Тел.: +7(495) 786-25-57
E-mail:
URL: bionika-media.ru
