Архив журнала «Онкохирургия» за 2013 год
Применение метода атомно-силовой микроскопии в цитологической диагностике опухолей различных локализаций
Славнова Е.Н.1, Чиссов В.И.1, Решетов И.В.1, Волченко Н.Н.1, Кудрин К.Г.2
1) Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П.А. Герцена,
2) Институт повышения квалификации Федерального медико-биологического агентства»,
Москва, Россия
Использование атомно-силовой микроскопии (АСМ) открывает новые возможности в цитологической диагностике, поскольку метод за небольшое время (минуты) позволяет получить изображение поверхности клеток с разрешением порядка нескольких нанометров, а также получить объективные морфометрические показатели клеток.
Цель нашего исследования – определить роль АСМ в цитологической диагностике опухолей и опухолеподобных процессов различных локализаций.
Материалы и методы. В работе использовался исследовательский комплекс Интегра производства «ЗАО НТ НДТ» г. Зеленоград, Россия. Зондовая НаноЛаборатория Интегра представлена комплексом высокотехнологичных приборов на базе АСМ.
Исследовали 51 цитологический тонкоигольный аспирационный биоптат опухолей молочной и щитовидной желез, мазки-отпечатки с биоптатов слизистой оболочки желудка, полученные с помощью щипцовой биопсии у 30 пациентов с различными поражениями желудка: 10 с диагнозом гастрит, 10 с полипом желудка и рак желудка – 10. Все рутинные цитологические мазки окрашивались азур-эозином. Кроме того, анализу подвергли 17 соскобов с поверхности шейки матки. Цитологические препараты готовили методом жидкостной цитологии с помощью цитоцентрифуги Cytospin. 10 больным раком молочной железы проводили иммуноцитохимическое исследование методом Ultra Vision для определения экспрессии онкобелка Her2/neu (CerbB-2).
Результаты исследования. Метод позволяет определить объективные дифференциально-диагностические критерии рака. Для клеток рака молочной железы характерно статистически значимое увеличение соотношения высоты ядра и цитоплазмы по сравнению с фиброаденомой. Этот параметр может служить объективным критерием дифференциальной диагностики фиброаденомы и рака молочной железы (при раке – 2,5±1,0 при фиброаденоме – 1,8±0,4, p<0,05). При исследовании папиллярного рака щитовидной железы методом атомно-силовой микроскопии одним из важных диагностических признаков является обнаружение внутриядерных включений цитоплазмы, глубина которых 290±82 нм
Для папиллярного рака щитовидной железы также установлено достоверное увеличение соотношения высоты ядра и цитоплазмы по сравнению с клетками коллоидного зоба. Наши измерения показали, что клетки коллоидного зоба щитовидной железы и папиллярного рака щитовидной железы различаются статистически значимо (p<0,05) по следующим параметрам: высота цитоплазмы, высота ядра, соотношение высот ядра и цитоплазмы (для коллоидного зоба 1,9±0,6, папиллярного рака щитовидной железы 2,5±1,2).
Установлено, что объективным критерием дифференциальной диагностики между ПР ЩЖ и фолликулярной аденомой может служить отношения высоты ядрышка к высоте ядра (для папиллярного рака 0,63±0,43, для фолликулярной аденомы 0,34±0,21, p<0,05).
Для клеток гастрита, полипа и рака желудка получены количественные характеристики: высоты цитоплазмы, ядра, ядрышка и их соотношения. Различия были получены в значениях соотношения высоты ядра и цитоплазмы: для нормальных клеток 1,5±0,01 – 2,08+0,02, для клеток рака 2,49±0,07. Различались показатели отношения высоты ядрышка к высоте ядра: для полипов – 2,08±0,02, для рака – 0,176±0,003.
Обнаружена обратная тенденция к уменьшению ядерно-цито-плазматического соотношения для клеток ороговевающего плоскоклеточного рака по сравнению с морфологически нормальными клетками плоского эпителия шейки матки. Для расчетов брали высоту цитоплазмы в зоне ороговения (для плоскоклеточного рака – 2,08±1,21, для нормальных клеток плоского эпителия – 2,96±1,01, p<0,05).
Метод АСМ позволяет измерять глубину околоядерного просветления цитоплазмы, являющегося одним из проявлений папилломовирусной инфекции в клетках плоского эпителия шейки матки. При АСМ койлоцитов визуализируется перинуклеарная «канавка», соответствующая зоне околоядерного просветления, глубина «канавки» – 200 нм.
АСМ позволяет дополнительно оценивать результат иммуно- цитохимической реакции. В нашем исследовании гиперэкспрессия Her2/neu при АСМ проявлялась в виде четкого замкнутого возвышения цитоплазмы.
Таким образом, метод АСМ позволяет объективизировать цитологическую диагностику рака молочной, щитовидной желез, рака желудка, шейки матки. Благодаря применению метода АСМ возможно получить количественные объективные показатели уровня экспрессии антител к тиреглобулину и онкопротеину Her2/neu при иммуноцитохимии.
Стр. 82
Издательство
«Бионика Медиа»
Москва, ул. Профсоюзная, 57
(в здании НИИ "Полиграф")
Тел.: +7(495) 786-25-57
E-mail:
URL: bionika-media.ru
